顯色劑可以分成兩大類:一類是檢查一般有機化合物的通用顯色劑;另一類是根據化合物分類或特殊官能團設計的專屬性顯色劑。顯色劑種類繁多,本章只能列舉一些常用的顯色劑。
l.通用顯色劑
①硫酸常用的有四種溶液:硫酸-水(1:1)溶液;硫酸-甲醇或乙醇(1:1)溶液;1.5mol/L硫酸溶液與0.5-1.5mol/L硫酸銨溶液,噴后110oC烤15min,不同有機化合物顯不同顏色。
②0.5%碘的氯仿溶液 對很多化合物顯黃棕色。
③中性0.05%高錳酸鉀溶液易還原性化合物在淡紅背景上顯黃色。
④堿性高錳酸鉀試劑 還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色。
溶液I:1%高錳酸鉀溶液;溶液Ⅱ:5%碳酸鈉溶液;溶液I和溶液Ⅱ等 量混合應用。
⑤酸性高錳酸鉀試劑 噴1.6%高錳酸鉀濃硫酸溶液(溶解時注意防止爆炸),噴后薄層于180oC加熱15~20min。
⑥酸性重鉻酸鉀試劑 噴5%重鉻酸鉀濃硫酸溶液,必要時150oC烤薄層。
⑦5%磷鉬酸乙醇溶液 噴后120oC烘烤,還原性化合物顯藍色,再用氨氣薰, 則背景變為無色。
⑧鐵氰化鉀-三氯化鐵試劑還原性物質顯藍色,再噴2mol/L鹽酸溶液,則藍色加深。
溶液I:1%鐵氰化鉀溶液;溶液Ⅱ:2%三氯化鐵溶液;臨用前將溶液I和溶液Ⅱ等量混合。
2.專屬性顯色劑
由于化合物種類繁多,因此專屬性顯色劑也是很多的,現將在各類化合物中最常用的顯色劑列舉如下:
(1)烴類
①硝酸銀/過氧化氫
檢出物:鹵代烴類。
溶液:硝酸銀O.1g溶于水lml,加2-苯氧基乙醇lOOml,用丙酮稀釋至200ml,再加30%過氧化氫1滴。
方法:噴后置未過濾的紫外光下照射;
結果:斑點呈暗黑色。
②熒光素/溴
檢出物:不飽和烴。
溶液:I.熒光素0.1g溶于乙醇lOOml;Ⅱ.5%溴的四氯化碳溶液。
方法:先噴(I),然后置含溴蒸氣容器內,熒光素轉變為四溴熒光素(曙紅),熒光消失,不飽和烴斑點由于溴的加成,阻止生成曙紅而保留熒光,多數不飽和烴在粉紅色背景上呈黃色。
③四氯鄰苯二甲酸酐
檢出物:芳香烴。
溶液:2%四氯鄰苯二甲酸酐的丙酮與氯代苯(10:1)的溶液。
方法:噴后置紫外光下觀察。
④甲醛/硫酸
檢出物:多環芳烴。
溶液:37%甲醛溶液O.2ml溶于濃硫酸l0ml。
(2)醇類
①3,5一二硝基苯酰氯
檢出物:醇類。
溶液:I.2%本品甲苯溶液;Ⅱ.0.5%氫氧化鈉溶液;Ⅲ.O.002%羅丹明溶液。
方法:先噴(I),在空氣中干燥過夜,用蒸氣薰2min,將紙或薄層通過試液(Ⅱ)30s,噴水洗,趁濕通過(Ⅲ)15s,空氣干燥,紫外燈下觀察。
②硝酸鈰銨
檢出物:醇類。
溶液:I.1%硝酸鈰銨的0.2mol/L硝酸溶液;Ⅱ.N,N-二甲基-對苯二胺鹽酸鹽1.5g溶于甲醇、水與乙酸(128m1+25m1+1.5m1)混合液中,用前將(I)與(Ⅱ)等量混合。噴板后于105oC加熱5min。
③香草醛/硫酸
檢出物:高級醇、酚、甾類及精油。
溶液:香草醛1g溶于硫酸lOOml。
方法:噴后于120oC加熱至呈色最深。
④二苯基苦基偕肼 ’
檢出物:醇類、萜烯、羰基、酯與醚類。
溶液:本品15mg溶于氯仿25ml中。
方法:噴后于110oC加熱5~lOmin。
結果:紫色背景呈黃色斑點。
(3)醛酮類
①品紅/亞硫酸
檢出物:醛基化合物。
溶液:I.0.01%品紅溶液,通入二氧化硫直至無色;Ⅱ.0.05mol/L氯化汞溶液;
Ⅲ.O.05mol/L硫酸溶液。
方法:將I、Ⅱ、Ⅲ以1:1:10混合,用水稀釋至l00ml。
②鄰聯茴香胺
檢出物:醛類、酮類。
溶液:本品乙酸飽和溶液。
③2,4-二硝基苯肼
檢出物:醛基、酮基及酮糖。
溶液:I.0.4%本品的2mol/L鹽酸溶液; Ⅱ.本品O.1g溶于乙醇l00ml中,加濃鹽酸lml。
方法:噴溶液I或Ⅱ后,立即噴鐵氰化鉀的2mol/L鹽酸溶液。
結果:飽和酮立即呈藍色;飽和醛反應慢,呈橄欖綠色;不飽和羰基化合物不顯色。
④繞丹寧
檢出物:類胡蘿卜素醛類。
溶液:I.1%~5%繞丹寧乙醇溶液;Ⅱ.25%氫氧化銨或27%氫氧化鈉溶液。
方法:先噴溶液I,再噴溶液Ⅱ,干燥。
(4)有機酸類
①溴甲酚綠
檢出物:有機酸類。
溶液:溴甲酚綠0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml。
方法:浸板。
結果:藍色背景產生黃色斑點。
②高錳酸鉀/硫酸
檢出物:脂肪酸衍生物。
溶液:見通用顯色劑酸性高錳酸鉀。
③過氧化氫
檢出物:芳香酸。
溶液:0.3%過氧化氫溶液。
方法:噴后置紫外光(365nm)下觀察。
結果:呈強藍色熒光。
④2,6-二氯苯酚-靛酚鈉
檢出物:有機酸與酮酸。
溶液:0.1%本品的乙醇溶液。
方法:噴后微溫。
結果:藍色背景呈紅色。
(5)酚類
①Emerson 試劑(4-氨基安替比林/鐵氰化鉀(Ⅲ))
檢出物:酚類、芳香胺類及揮發油。
溶液:I.4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml;Ⅱ.鐵氰化鉀(Ⅲ)4g溶于水50ml,用乙醇稀釋至100ml。
方法:先噴溶液I,在熱空氣中干燥5min,再噴溶液Ⅱ,再于熱空氣中干燥5min,然后將板置含有氨蒸氣(25%氨溶液)的密閉容器中。
結果:斑點呈橙-淡紅色。揮發油在亮黃色背景下呈紅色斑點。
②Boute 反應
檢出物:酚類、氯、溴、烷基代酚。
方法:將薄層置有NO2蒸氣(含濃硝酸)的容器中3~10min,再用NH2蒸氣(濃氨液)處理。
③氯醌(四氯代對苯醌)
檢出物:酚類。
溶液:1%本品的甲苯溶液。
④DDQ(二氯二氰基苯醌)試劑
檢出物:酚類。
溶液:2%本品的甲苯溶液。
⑤TCNE (四氰基乙烯)試劑
檢出物:酚類、芳香碳氫化物、雜環類、芳香胺類。
溶液:0.5%~1%本品的甲苯溶液。
⑥Gibb’s(2,6-二溴苯醌氯亞胺)試劑
檢出物:酚類。
溶液:2%本品的甲醇溶液。
⑦氯化鐵
檢出物:酚類、羥酰胺酸。
溶液:1%~5%氯化鐵的0.5mol/L鹽酸溶液。
結果:酚類呈藍色、羥酰胺酸呈紅色。
(6)含氮化合物
①FCNP(硝普鈉/鐵氰化物)試劑
檢出物:脂肪族含氮化物,如氨基氰、胍、脲與硫脲及其衍生物,肌酸及肌酐。
溶液:10%氫氧化鈉溶液、10%硝普鈉溶液、10%鐵氰化鉀溶液與水按1:1:1:3混合,在室溫至少放置20min,冰箱保存數周,用前將混合液與丙酮等體積混合。
②Dragendorff(碘化鉍鉀試劑)試劑
檢出物:芳香族含氮化合物,如生物堿類、抗心律不齊藥物。
溶液:I.堿式硝酸鉍0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中;Ⅱ.碘化鉀8g溶于水20ml中。
將上述溶液I及Ⅱ等量混合,置棕色瓶中作為儲備液,用前取儲備液lml、冰醋酸2ml與水l0ml混合。
結果:呈橘紅色斑點。
③4-甲基傘形酮
檢出物:含氮雜環化合物。
溶液:本品0.02g溶于乙醇35ml,加水至100ml。
方法:噴板后置25%氨水蒸氣的容器中,取出后于紫外燈(365nm)下觀察。
④碘鉑酸鉀
檢出物:生物堿類及有機含氮化物。
溶液:10%六氯鉑酸溶液3ml與水97ml混合,加6%碘化鉀溶液,混勻。臨用前配制。
⑤硫酸高鈰銨/硫酸
檢出物:生物堿及含碘有機化物。
溶液:硫酸鈰1g混懸于4ml水中,加三氯乙酸1g,煮沸,逐滴加入濃硫酸直至混濁消失。
方法:噴后薄層于1l0oC加熱數分鐘。
結果:阿樸嗎啡、馬錢子堿、秋水仙堿、罌粟堿、毒扁豆堿與有機碘化物均能檢出。
⑥Ehrlich (對二甲氨基苯甲醛/鹽酸)試劑
檢出物:吲哚衍生物及胺類。
溶液:1%本品的濃鹽酸溶液與甲醇按1:1混合。
方法:噴后板于50oC加熱20min。
結果:呈不同顏色的斑點。