【摘要】 目的探討石榴皮中鞣質和黃酮類化合物的體外抑菌活性效果并確認其有效部位。方法提取兩種化合物，采用試管兩倍稀釋法對金黃色葡萄球菌、福氏痢疾桿菌、沙門氏菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌進行體外抑菌實驗。結果石榴皮中鞣質類化合物對金黃色葡萄球菌、福氏痢疾桿菌、沙門氏菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌均有不同程度的抑菌作用，而黃酮類化合物對綠膿桿菌和白色念珠菌抑菌效果不強。結論石榴皮中鞣質和黃酮類化合物有一定的抑菌作用，且鞣質類化合物呈現廣譜抗菌特性，并具有抗耐藥菌作用。
【關鍵詞】 石榴皮鞣質 黃酮 抑菌作用
An Experimental Study on the Antibacterial Activity of the Tannin and Flavonoid in Punica granatum L.
Abstract:ObjectiveTo discuss the antibacterial activity of the tannin and flavonoid in Punica granatum L..Methods The tannin and flavonoid from Punica granatum L. were prepared, and subject to bacteriostatic tests in vitro by test tube continuously in order to observe their minimal in hibitory concentration (MIC) to Staphylococcus aureus, Shigellaf, Salmonella, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans.ResultsThe tannin had antimicrobial activity against the six kinds of bacteria in different degrees, but the flavonoid had little antibacteria effect on Pseudomonas aeruginosa and Candida dlbicans.Conclusion The tannin has broad spectrum of antimicrobial activity and has antimicrobial effect to drug resistance bacteria.
Key words:Punica granatum L.; Tannin; Flavonoid; Antibacterial activity
石榴皮是石榴科植物石榴Punica granatum L.的果皮。石榴皮因有收斂澀腸，清熱燥濕等功效，民間常用來治療多種疾病。大量研究表明，石榴皮對綠膿桿菌、福氏痢疾桿菌、傷寒桿菌等有抗菌作用，對多種皮膚真菌也有不同程度的抑制作用，還有抗流感病毒的作用［1］。為確認其有效部位，將其所含組分較多的鞣質類和黃酮類化合物提取分離后，進行體外抑菌實驗研究。
1 材料與方法
1.1 藥品石榴皮購于武漢銀杏中藥飲片廠，經武漢大學藥學院張洪教授鑒定為石榴科石榴屬石榴Punica granatum L.的果皮。
1.2 菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923，福氏痢疾桿菌ATCC8144，沙門氏菌ATCC20020，大腸桿菌ATCC25922，綠膿桿菌ATCC4257，白色念珠菌ATCC0737。以上菌株均由三峽大學護理學院檢驗教研室鑒定保存。
1.3 菌液的制備將試驗菌種接種于MH瓊脂平板上，37℃培養18 h后，用MH肉湯將菌苔洗下配成細菌懸液，經比濁法判定菌量，配制成1×106CFU/ml菌液。
1.4 藥物紙片的制備將直徑為6 mm的滅菌濾紙片浸透于稀釋濃度為100 μg/ml總鞣質和總黃酮提取物藥液中，2 h后取出烘干備用。
1.5 方法
1.5.1 黃酮和鞣質的制備石榴皮粗粉，用70%乙醇超聲提取30 min，提取液減壓濃縮，水溶液加4%明膠溶液沉淀，抽濾，上清液用醋酸乙酯溶液萃取，醋酸乙酯層減壓濃縮至膠狀，加適量水溶解，濾去不溶物，清液冷凍干燥得黃酮粉末。而明膠沉淀用50%丙酮水溶液溶解，離心棄去沉淀，丙酮溶液減壓濃縮，所得膠狀物用水溶解，再用醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯層減壓濃縮至膠狀，加適量水溶解，濾去不溶物，清液冷凍干燥得鞣質粉末。
1.5.2 抑菌活性的測定［2］
將培養基滅菌后倒入平皿內，每個平皿約20 ml，待培養基凝固后，取已校正濃度的菌液0.2 ml分別涂布培養基表面，制成含菌平板。室溫2～5 min后，平鋪藥物紙片，置37℃恒溫箱培養16～18 h后，用卡尺精確測量紙片周圍抑菌圈直徑的大小，結果以mm表示，以無菌生理鹽水作空白對照，測3次求平均值。以上操作均在無菌室內進行。
1.5.3 最低抑菌濃度（MIC）的測定［2］
采用兩倍稀釋法檢測藥液的MIC，即取12支無菌試管編號，1～11號無菌試管各加入1 ×106 CFU/ml菌液1 ml，取1 ml原藥液置于第1號試管中，均勻混合，繼而吸取1 ml加入第2號試管內，依次類推稀釋至10號管，棄去1 ml，第11號管作為不加藥液的陽性對照管，第12號管只加藥液1 ml作為不加菌懸液的陰性對照管。稀釋后最終濃度為500，250，125，62.5，31.2，15.6，7.8，3.9，1.95，0.98 μg/ml的藥液用于測定MIC，將各試管搖勻后置于37℃的恒溫箱中培養24 h后觀察結果。
2 結果
2.1 鞣質和黃酮的抑菌活性結果見表1。表1 抑菌實驗結果（略）
2.2 鞣質和黃酮的體外抑菌實驗結果見表2～3。表2 鞣質的體外抑菌實驗結果（略）表3 黃酮的體外抑菌實驗結果（略）
3 討論
實驗結果表明，石榴皮中的鞣質類和黃酮類化合物對金黃色葡萄球菌、福氏痢疾桿菌、沙門氏菌、大腸桿菌均有明顯的抑菌作用，鞣質類化合物對以上四種細菌的作用更加敏感，由此初步判斷石榴皮抗菌消炎，治療腸炎、痢疾的有效部位應屬此兩類化合物。
綠膿桿菌在我國燒傷病人中的感染率多年來占據第1位，且易出現多重耐藥性［3,4］。石榴皮中鞣質類化合物對綠膿桿菌的抑菌圈為15 mm，且MIC為31.20 μg/ml，而黃酮類化合物對綠膿桿菌沒有抑菌活性，說明石榴皮治療水火燙傷導致感染的有效部位應屬鞣質類化合物。
白色念珠菌為天然耐藥菌，對大量長期應用抗生素和久治不愈的重癥感染者具有很大的威脅［5］。綠膿桿菌為醫院感染常見的病原菌，可對多種抗生素產生耐藥性［6,7］。石榴皮中鞣質類化合物對白色念珠菌和綠膿桿菌的抑菌圈均≥10 mm，且MIC分別為62.50和31.20 μg/ml，呈現出一定的抑菌活性，而黃酮類化合物對這兩種細菌沒有抑菌作用或抑菌作用不強，由此可初步判斷石榴皮中鞣質類化合物具有抗耐藥菌作用，且呈現廣譜抗菌特性。
通過對石榴皮中黃酮和鞣質抑菌實驗結果判斷，其結果可作為藥效學的初步判斷依據。天然藥物有效成分的確認對中藥現代化、新藥的開發研究意義重大，本實驗基于此前提進行了初步研究，以供參考。