中國藥典1995年版收載了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，廣大藥學(xué)工作者積極探索該方法用于藥典未收載品種實行的可行性。現(xiàn)將有關(guān)資料綜述如下，為推廣和完善細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法提供參考。
1 藥品種類
試驗品種以大輸液及抗生素占大多數(shù)，生化藥品、中草藥制劑等很少，可能與這些藥品成分復(fù)雜，干擾因素多有關(guān)。
2 試驗方法
以凝膠法占絕大多數(shù)，主要原因是凝膠法為藥典收載，方法成熟，操作簡便，而其它方法由于多種限制，尚未普及應(yīng)用。
2.1 供試品陽性對照 黃清泉〔1〕認(rèn)為應(yīng)增加供試品陽性對照，即在0.1 ml鱟試劑中加入用供試品溶液制成的2λ標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素溶液。最終結(jié)果陰性對照呈陰性，陽性對照和供試品陽性對照均呈陽性，試驗結(jié)果方有效。設(shè)陽性對照是證明在試驗條件下所用鱟試劑的靈敏度符合規(guī)定；設(shè)陰性對照證明所用檢查用水中檢不出內(nèi)毒素；設(shè)供試品陽性對照則是證明試驗條件下供試品溶液不存在抑制因素。
2.2 試驗重現(xiàn)性差 同一品種不同實驗者所得結(jié)果不一致。如2 g/L環(huán)丙沙星注射液，杜氏〔2〕稀釋一倍，胡氏〔3〕則將樣品1∶6稀釋。張嘉麗〔4〕認(rèn)為葡萄糖氯化鈉注射液需1∶1稀釋，伊氏〔5〕未稀釋。蔡紅〔6〕發(fā)現(xiàn)在鱟試劑均符合藥典規(guī)定前提下，同一品種生產(chǎn)廠家不同結(jié)果不同。筆者以為上述問題的根源是鱟試劑標(biāo)準(zhǔn)化問題。鱟試驗系統(tǒng)工程化〔7〕(試劑標(biāo)準(zhǔn)化、鱟試驗儀測化、實驗室標(biāo)準(zhǔn)化、試驗器具優(yōu)化、操作規(guī)范化)對于提高該方法的整體應(yīng)用水平，解決重現(xiàn)性差的問題，將起重要作用。
2.3 檢品供試液pH值 高國政〔8〕用動態(tài)濁度法研究pH值對細(xì)菌內(nèi)毒素測定的影響，比較TAL(東方鱟試劑)和LAL(美洲鱟試劑)的不同。結(jié)果顯示兩種鱟試劑回收曲線都呈現(xiàn)三個反應(yīng)高峰，分別為pH5.20，pH7.83/pH6.23和pH10.55。樣品pH值6～8，實驗結(jié)果穩(wěn)定；pH值≤3或≥12，試驗受到抑制。使用TAL，檢品pH預(yù)調(diào)在6.5～7.5，使用LAL，檢品pH應(yīng)預(yù)調(diào)在6.2±0.1或6.7～7.8。
2.4 直接稀釋法〔9〕 根據(jù)稀釋倍數(shù)計算出每支樣管需要加入藥品原液及溶解用水的體積(兩者之和為0.2 ml)，準(zhǔn)確吸取混合，不必另外稀釋檢品，可以減少中間污染環(huán)節(jié)，操作亦簡便易行。
2.5 藥品生產(chǎn)過程質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 侯慶源〔10〕抽取出現(xiàn)散在熱原反應(yīng)的生理鹽水，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法定量考察，發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素濃度大于0.5 EU/ml(不合格)者占62.5%，而且樣本之間有明顯差異，提示可能與輸液瓶清除熱原效果差異及散在污染因素有關(guān)。