掃碼登記、鼻拭子、咽拭子采樣、保存、轉運、檢測-核酸檢測流程隨著疫情常態化防控為大眾所熟悉。有效的病毒保存是準確核酸檢測結果的重要保障,構建穩定高效的病毒保存液,作為病毒的采集、運輸保存及檢測的溶液介質時其中關鍵。
病毒保存液種類:
目前病毒保存液分為兩種,滅活型及非滅活型,兩種方式各有特點,非滅活型不含裂解鹽,但是保存的病毒完整性更好,檢出率更高,除了核酸檢測外還可以用于其他研究;滅活型病毒保存液則使用上更安全,操作環境要求也不用那么嚴格。
<非滅活型病毒保存液>
目前研究的非滅活病毒保存液的成分主要為Hank's液基礎,添加BSA、氨基酸、維生素等病毒所需的營養成分以及生物緩沖劑、冷凍保護劑、甘油等多種組分,可在較寬的溫度范圍內維持病毒的活性,最大程度保持樣本的原始性,可以用于病毒的核酸提取檢測、病毒的培養和分離。
<滅活型病毒保存液>
添加有裂解鹽的病毒保存液就是滅活型的病毒保存液,通過將采集到的樣本與病毒裂解液和病毒核酸保存液進行充分混合,實現對樣本中病毒的滅活,同時有效保證樣本中的病毒核酸完整性,采集后的標本能夠在常溫條件下運輸和長期保存。保存的病毒RNA樣本可廣泛應用于基因檢測、酶聯免疫法檢測(ELISA)、PCR檢測等。滅活保存液有含胍鹽、非呱鹽及直擴之分,其中以呱鹽型為最常用。
呱鹽裂解保存原理:
高濃度的呱鹽,是一類強力的蛋白質變性劑,可以破壞核酸與蛋白質之間的次級鍵,使核蛋白解聯,從而把病毒核酸釋放出來。可以直接裂解滅活病毒,不需要加熱處理樣本,簡便快捷。
目前最常用于病毒裂解的呱鹽時異硫氰酸胍、鹽酸胍,他們無RNA酶和DNA酶活性,能夠破壞RNA酶的分子結構,使樣本中可能存在的核酸酶失活,起到穩定保存病毒樣本的作用。
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